PCR 預混液（染料）

【產品組分 【產品概述】 本產品為預混的含有優化濃度的 LongRange DNA Polymerase、dNTPs、Mg2+、反應緩沖液和穩定劑等成分的即用型 2 倍 濃度的 PCR 溶液，對 10 kb 以上的長 DNA 片段具備較強的擴增能力，擴增速度為 30 s/kb，故適用于構建基因圖譜。在標 準緩沖液中其保真度約相當于普通 Taq DNA Polymerase 的 6 倍。部分 PCR 產物 3’-末端附有突出的“A”堿基，可直接進 行 T 載體克隆，加 A 處理后可提高 TA 克隆效率。 使用含染料的產品在 PCR 反應完成后，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳；也可經過純化處理，以用于酶切、連接、 熒光測序等后續操作。 】組分名稱 A078-01 A078-05 2×LongRange PCR Mix (Dye) 1 ml 1 ml × 5 Sterile Water 1 ml 1 ml × 5 【使用方法】 用戶需自備的試劑：DNA模板、引物。 注：所有組分應仔細混勻并離心后開啟，所有PCR操作過程應在冰上進行。 操作示例：以50 μl PCR反應體系為例。 1. 按照下表配制 PCR 反應體 【保存條件】 -20℃保存，保質期 24 個月，避免反復凍融。如需經常使用，可置于 4℃保存至少 3 個月。 系 組分 體積 DNA 模板* X μl 正向引物（10 μM） 2.5 μl 反向引物（10 μM） 2.5 μl 2×LongRange PCR Mix (Dye) 25 μl Sterile Water 補足至 50 μl 2. PCR 反應循環的設置 流程 溫度 時間 預變性 94℃ 2 min 變性 94℃ 30 s 退火 55-65℃ 30 s 延伸 72℃ 30 s/kb 終延伸 72℃ 5-10 min *模板量：10-1000 ng 基因組 DNA，1-30 ng 質粒，或 1-2 μl RT-PCR 反應后的 cDNA。 注：以上舉例為常規 PCR 反應系統，僅供參考。實際反應條件因模板、引物等的結構不同而各異，需根據模板、引物、目的片段的特點設定最佳反應 條件，并根據比例放大或縮小反應體系。 3. 結果檢測：取 2-5 μl 反應液電泳觀察結果。含染料產品可直接上樣電泳，無染料產品需添加上樣緩沖液后進行電泳。 【注意事項】 1. 模板 DNA 的純度和完整性是長片段 PCR 成功的關鍵。擴增 10 kb 以上的 DNA 片段時，應采用高質量的 DNA 提取試劑 或試劑盒制備模板 DNA，而不能采用加熱或蛋白酶消化法粗提的 DNA。同時引物的設計也至關重要。建議引物的長度在 30 個堿基左右，以保證其特異性。 2. TA 克�。菏褂� 2×LongRange PCR Mix (Dye)擴增的 PCR 產物一部分附有 3’-末端突出的 A 堿基，可以進行 TA 載體 克隆。 貨號 規格 A078-01 1 ml × 1 支，含染料 A078-05 1 ml × 5 支，含染料 貨號：A078 保存：-20℃ 運輸：低溫 25-35 循環 版本號：V2201013. 對保真性能要求比較高的片段擴增，建議使用我公司的 2×SuperStar HiFi Plus PCR Mix (Dye)（Cat# A082）或者 2×SuperStar HiFi PCR Mix (Dye)（Cat# A088）。