瓊ICP備2022012426號
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感受態細胞制作方法折疊CaCl2法1.將快速生長的大腸桿菌置于經低溫(0℃)預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞 細胞壁通透性發生變化，極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基-磷酸鈣復合物。 聯合其它的二價金屬離子(如Mn、Co)、DMSO或還原劑等物質處理細菌，則可使轉化率提高100~1000倍。 2.此時，將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激(90s)，細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動，并隨機出現許多間隙，外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過復制、表達，實現遺傳信息的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。 折疊電轉法電擊法不需要預先誘導細菌的感受態，依靠短暫的電擊，促使DNA進入細菌，轉化率最高能達到10~10轉化子/ug閉環DNA。因操作簡便，愈來愈為人們所接受。 上一篇在海南感受態細胞的意義下一篇海南感受態細胞的特點 |
